उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी में मुख्य रूप से इंजेक्शन प्रणाली, जलसेक प्रणाली, पृथक्करण प्रणाली, पहचान प्रणाली और डेटा प्रोसेसिंग प्रणाली शामिल है। निम्नलिखित उनकी संबंधित रचनाओं और विशेषताओं का परिचय देंगे।
1. इंजेक्शन प्रणाली आमतौर पर इंजेक्शन ऑपरेशन को पूरा करने के लिए एक स्थिर इंजेक्शन मात्रा के साथ एक डायाफ्राम इंजेक्टर या उच्च दबाव इंजेक्शन कक्ष का उपयोग करती है। यह नमूना विश्लेषण की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता में सुधार के लिए फायदेमंद है।
2. जलसेक प्रणाली में तीन भाग होते हैं: एक उच्च दबाव पंप, एक मोबाइल चरण जलाशय, और एक ग्रेडिएंट मीटर। उच्च दबाव वाले पंप का सामान्य दबाव l होता है। 47-4.4X107Pa, समायोज्य और स्थिर प्रवाह दर। जब उच्च दबाव वाला मोबाइल चरण क्रोमैटोग्राफिक कॉलम से गुजरता है, तो यह कॉलम के अंदर नमूने के प्रसार प्रभाव को कम कर सकता है, कॉलम के अंदर गति की गति को तेज कर सकता है, पृथक्करण की डिग्री में सुधार कर सकता है और नमूने को पुनर्प्राप्त कर सकता है। नमूने की जैविक गतिविधि को बनाए रखने के लिए फायदेमंद। मोबाइल चरण भंडारण त्रुटि और ग्रेडिएंट विश्लेषक स्थिर चरण और नमूने के गुणों के अनुसार मोबाइल चरण को बदल सकता है, जिसमें ध्रुवीयता, आयन शक्ति और एलुएंट के पीएच मान को बदलना, या प्रतिस्पर्धी अवरोधकों या विकृतीकरण एजेंटों का उपयोग करना शामिल है। यह कई पदार्थों को प्रभावी ढंग से अलग करने में सक्षम बनाता है, भले ही अंतर या आइसोमर्स का केवल एक ही सेट हो।
3. पृथक्करण प्रणाली में क्रोमैटोग्राफी कॉलम, कनेक्टिंग ट्यूब, थर्मोस्टेट आदि शामिल हैं। क्रोमैटोग्राफिक कॉलम की लंबाई आम तौर पर 10-50 सेमी होती है (यदि दो की आवश्यकता होती है, तो उनके बीच एक कनेक्टिंग ट्यूब जोड़ी जा सकती है), एक आंतरिक व्यास के साथ 2-5मिमी का, उच्च गुणवत्ता वाले स्टेनलेस स्टील या मोटी दीवार वाली ग्लास ट्यूब या टाइटेनियम मिश्र धातु से बना है। 5-10 μm (एक मैट्रिक्स और एक फिक्सेटिव से बना) के कण आकार के साथ एक निश्चित चरण होता है। स्थिर चरण में मैट्रिक्स उच्च यांत्रिक शक्ति वाले राल या सिलिका जेल से बना होता है, जिसमें जड़ता होती है (जैसे कि क्षारीय सिलिका जेल हटा दिया गया है), सरंध्रता (छिद्र का आकार 1000 तक?), और बड़ा विशिष्ट सतह क्षेत्र होता है। उन्हें युग्मन के लिए यांत्रिक रूप से लेपित किया जाता है (गैस क्रोमैटोग्राफी स्थिर चरणों की तैयारी के समान), या रासायनिक रूप से विभिन्न जीनों (जैसे फॉस्फेट, क्वाटरनेरी अमीनो, हाइड्रोक्सीमिथाइल, फिनाइल, अमीनो, या कार्बन श्रृंखला एल्काइल की विभिन्न लंबाई) या लिगैंड कार्बनिक यौगिकों के साथ युग्मित किया जाता है। . तो, इस निश्चित सापेक्ष संरचना में अच्छी चयनात्मकता है। उदाहरण के लिए, छिद्रपूर्ण सिलिका जेल की सतह पर मटर एग्लूटीनिन (पीएसए) को जोड़ने के बाद, फ़ाइब्रोब्लास्ट में ग्लाइकोप्रोटीन को अलग किया जा सकता है। इसके अलावा, स्थिर चरण आधारित प्लास्मिड छोटा है और स्तंभ बिस्तर एक समान और सघन स्थिति प्राप्त करना आसान है। भंवर धारा प्रसार प्रभाव को कम करना आसान है। मैट्रिक्स कण का आकार छोटा है, माइक्रोपोर उथले हैं, और माइक्रोपोरस क्षेत्र में नमूने का बड़े पैमाने पर स्थानांतरण कम है। ये बैंडविड्थ को कम करने और रिज़ॉल्यूशन में सुधार के लिए फायदेमंद हैं। स्तंभ प्रभाव सिद्धांत विश्लेषण के अनुसार, मैट्रिक्स कण का आकार जितना छोटा होगा और प्लेट की सैद्धांतिक संख्या N उतनी ही बड़ी होगी। इससे यह सिद्ध होता है कि मैट्रिक्स कण का आकार जितना छोटा होगा, पृथक्करण की डिग्री उतनी ही अधिक होगी। इसके अलावा, उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी थर्मोस्टैट्स कमरे के तापमान से 60 डिग्री तक तापमान को समायोजित कर सकते हैं, बड़े पैमाने पर स्थानांतरण दर को बढ़ाकर विश्लेषण समय को छोटा कर सकते हैं। यह क्रोमैटोग्राफिक कॉलम की दक्षता में सुधार कर सकता है।
4. एचपीएलसी डिटेक्शन सिस्टम के लिए आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले डिटेक्टरों में पराबैंगनी डिटेक्टर, अपवर्तक सूचकांक डिटेक्टर और प्रतिदीप्ति डिटेक्टर शामिल हैं।
(1) यूवी डिटेक्टर पराबैंगनी (या दृश्य) प्रकाश के तहत अवशोषण विशेषताओं वाले नमूनों का पता लगाने के लिए उपयुक्त है। इसकी विशेषताएं: विस्तृत अनुप्रयोग सीमा (जैसे प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड, अमीनो एसिड, न्यूक्लियोटाइड, पेप्टाइड, हार्मोन, आदि); उच्च संवेदनशीलता (पता लगाने की सीमा 10-10 ग्राम/मिलीलीटर); विस्तृत रैखिक सीमा; तापमान और प्रवाह दर में परिवर्तन के प्रति संवेदनशील नहीं; ग्रेडिएंट समाधानों से निःसंक्रमित नमूनों का पता लगा सकता है।
(2) विभेदक अपवर्तक सूचकांक डिटेक्टर का उपयोग मोबाइल चरण डिटेक्टर द्वारा पता लगाए गए अपवर्तक सूचकांक से भिन्न सभी नमूना घटकों का पता लगाने के लिए किया जा सकता है। वर्तमान में, अधिकांश कार्बोहाइड्रेट यौगिकों का पता इस पहचान प्रणाली का उपयोग करके लगाया जाता है। सिस्टम में मजबूत सार्वभौमिकता और सरल संचालन है, लेकिन कम संवेदनशीलता (10-7 ग्राम/एमएल की पहचान सीमा), और मोबाइल चरण में बदलाव से अपवर्तक सूचकांक में बदलाव हो सकता है। इसलिए, यह न तो ट्रेस विश्लेषण के लिए उपयुक्त है और न ही ग्रेडिएंट एल्यूशन नमूनों का पता लगाने के लिए उपयुक्त है।
(3) प्रतिदीप्ति डिटेक्टर केवल प्रतिदीप्ति तीव्रता और उत्सर्जित प्रकाश की सांद्रता के आधार पर, कुछ शर्तों के तहत फ्लोरोसेंट कार्बनिक यौगिकों (जैसे पॉलीसाइक्लिक एरोमैटिक हाइड्रोकार्बन, अमीनो एसिड, एमाइन, विटामिन और कुछ प्रोटीन) के निर्धारण के लिए उपयुक्त है। इसकी संवेदनशीलता बहुत अधिक है (पहचान सीमा 10-12~10-14g/ml है), और इसका उपयोग ग्रेडिएंट रेफरेंस कार्य में ट्रेस विश्लेषण और पता लगाने के लिए किया जा सकता है।
5. डेटा प्रोसेसिंग सिस्टम नमूनों को अलग करने के लिए परीक्षण डेटा एकत्र, संग्रहीत, प्रदर्शित, प्रिंट और संसाधित कर सकता है, और तैयारी या पहचान कार्य सही ढंग से कर सकता है